پایان نامه بررسی بیان برخی miRNA در رده سلولی مشتق از سرطان رتینوبلاستوما بیان کننده افزایشی TGIF2LX در اثر مجاورت با داروی SD-208

فهرست:

فصل 1:مقدمه و بیان مسئله. 1

1‌.1‌رتینوبلاستوما 2

1‌.1‌.1‌ اپیدمیولوژی.. 2

1‌.1‌.2‌ پاتوژنز. 3

1‌.1‌.3‌ ویژگی های کلینیکی وتشخیصی.. 5

1‌.2‌ تاریخچه خانوادگی.. 5

1‌.3‌ تشخیص.... 5

1‌.4‌ ارزیابی قبل از درمان.. 6

1‌.5‌ درمان.. 6

1‌.6‌ مکانیسم مولکولی سرطان.. 9

1‌.6‌.1‌ مسیر پیام رسانی TGFβ 9

1‌.6‌.1‌.1‌ خانواده لیگاند های TGFβ.. 11

1‌.6‌.1‌.2‌ رسپتور نوع 1و2 ( TGFβRI,II) 11

1‌.6‌.1‌.3‌ فسفریلاسیون SMAD... 12

1‌.6‌.2‌ تنظیم پیام رسانی TGFβ. 12

1‌.6‌.3‌ دخالت پیام رسانیTGFβ  در سرطان.. 13

1‌.6‌.4‌ ژنهای همئوباکس(Homeobox) 14

1‌.6‌.4‌.1‌ ساختار ژن های همئوباکس..... 14

1‌.7‌     نقش ژن های همئوباکس (Homeobox) در ایجاد سرطان.. 17

1‌.8‌ miRNA    18

1‌.8‌.1‌ بیوژنز miRNA ها و نحوه مهار ترجمه. 19

1‌.9‌ miRNA و سرطان.. 20

1‌.10‌ miRNA ابزاری برای شناسایی و تشخیص سرطان.. 21

1‌.11‌ miRNA ودرمان سرطان.. 22

1‌.12‌   بیان مسئله و اهمیت پژوهش.... 23

1‌.13‌   اهداف پژوهش.... 24

1‌.13‌.1‌  هدف اصلی.. 24

1‌.13‌.2‌  اهداف ویژه 24

1‌.13‌.3‌  هدف کاربردی.. 25

فصل 2: بررسی متون.. 26

2‌.1‌ بررسی متون مرتبط با موضوع. 27

فصل 3:مواد و روش ها 32

3‌.1‌ مواد شیمیایی و آنزیم ها 33

3‌.1‌.1‌ پلاسمیدوسویه باکتری.. 35

3‌.1‌.1‌.1‌ خصوصیات پلاسمید.. 36

3‌.1‌.1‌.2‌ خصوصیات میزبان.. 37

3‌.2‌ روش ها 37

3‌.2‌.1‌ کشت باکتری.. 37

3‌.2‌.1‌.1‌ مواد و وسایل مورد نیاز برای کشت باکتری... 37

3‌.2‌.1‌.2‌ طرز تهیه محیط کشت LB مایع.. 38

3‌.2‌.1‌.3‌ گلیسرول استاک.... 38

3‌.2‌.2‌ روش انجام   miniprepاستخراج DNA  پلاسمیدی از باکتری.. 39

3‌.2‌.2‌.1‌ بررسی کمی وکیفی DNA پلاسمیدی... 41

3‌.2‌.3‌ هضم آنزیمی پلاسمید های استخراج شده 45

3‌.2‌.4‌ کشت سلولی.. 46

3‌.2‌.4‌.1‌ محیط کشت.... 46

3‌.2‌.4‌.2‌ سرم جنینی گاوFBS.. 47

3‌.2‌.4‌.3‌ تهیه محیط انجاد از سلولها 47

3‌.2‌.4‌.4‌ خصوصیات سلولهای مورد استفاده شده در این پایان نامه. 48

3‌.2‌.5‌ تعیین منحنی کشندگی انتی بیوتیک G418. 48

3‌.2‌.6‌ منطبق سازی سلولها 48

3‌.2‌.7‌ ترانسفکشن سلولهای Y79  با وکتور پلاسمیدی نوترکیب pEGFP-TGIF2LX.. 49

3‌.2‌.8‌ انتخاب سلولهای مثبت... 50

3‌.2‌.9‌ بررسی بیان ژن TGIF2LX در سلول های ترانسفکت شده در سطح mRNA بوسیله Realtime RT-PCR                               51

3‌.2‌.9‌.1‌ محافظت از RNA.. 52

3‌.2‌.9‌.2‌ استخراج RNA.. 55

3‌.2‌.9‌.3‌ تیمار نمونه RNA باآنزیم دئوکسی ریبونوکلئاز  I 59

3‌.2‌.9‌.4‌ سنتز DNA مکمل(cDNA) 60

3‌.2‌.9‌.5‌ PCR(Polymerase chain reaction) واکنش زنجیره ای پلیمراز. 64

3‌.2‌.9‌.6‌ واکنش Realtime PCR.. 68

3‌.2‌.9‌.7‌ تجزیه و تحلیل داده های حاصل از واکنش Realtime RT-PCR.. 77

3‌.2‌.10‌  بررسی بیان eGFP-TGIF2LX در سطح پروتئین بوسیله Western blot 78

3‌.2‌.10‌.1‌ الکتروفورز عمودی SDS-PAGE.. 78

3‌.2‌.10‌.2‌ رنگ آمیزی SDS-PAGE.. 84

3‌.2‌.10‌.3‌ وسترن بلاتینگ..... 86

3‌.2‌.11‌  بررسی میزان تکثیر سلولی بوسیله تجزیه نمک تترازولیوم. 90

3‌.2‌.11‌.1‌ بررسی اثر بیان افزایشی TGIF2LX سلولهای Y79 در مقایسه با کنترل.. 90

3‌.2‌.11‌.2‌ بررسی اثر متقابل SD-208 و بیان افزایشی TGIF2LX سلولهای Y79 در مقایسه با کنترل.. 91

3‌.2‌.11‌.3‌ پروتکل شمارش سلول.. 92

3‌.2‌.12‌  مطالعه بیان اثر داروی SD-208 بر روی بیانTGIF2LX, miRNA Let7g,18a,34a,22,20  در سلولهای ترانسفکت شده Y79 در مقایسه با نمونه های کنترل به وسیله Real time RT-PCR.. 92

فصل 4: نتایج و یافته ها 96

4‌.1‌Mini prep   و هضم DNA  پلاسمیدی جهت تایید وکتور نوترکیب... 97

4‌.2‌ بررسی بیانTGIF2LX  در سطح mRNA.. 98

4‌.2‌.1‌ نتیجه بررسی کیفی و کمی RNA.. 98

4‌.2‌.2‌ بررسی کیفی cDNA.. 99

4‌.3‌ بررسی بیان TGIF2LX  در سلولهای ترانسفکت شده 101

4‌.3‌.1‌ مطالعه بیان TGIF2LX  در سلولهای ترانسفکت شده Y79  در مقایسه با نمونه های کنترل بوسیله میکروسکوپ                                    101

4‌.3‌.2‌ تایید بیان واضح ژن GFP-TGIF2LX توسط Realtime RT- PCR.. 102

4‌.3‌.3‌ مطالعه بیان ژن TGIF2LX در سلول های ترانسفکت شده با وکتور حاوی GFP-TGIF2LX در سطح پروتئین بوسیله Western Blot 104

4‌.3‌.4‌ مطالعه بیان اثر داروی SD-208 بر روی بیانTGIF2LX  در سلولهای ترانسفکت شده Y79 در مقایسه با نمونه های کنترل                      105

4‌.4‌ بررسی اثر بیان افزایشی TGIF2LX بر روی سلولهای Y79. 105

4‌.4‌.1‌ نتایج ازمایش (MTT)Microculturetetrazolium Test 105

4‌.4‌.2‌ بررسی اثر متقابل SD-208 و بیان افزایشی TGIF2LX بر روی سلولهای Y79 در مقایسه با کنترل.. 106

4‌.5‌ بررسی بیان miRNA Let7g,18a,34a.22,20a در سلولهای ترانسفکت شده و کنترل.. 108

4‌.6‌ مطالعه بیان اثر داروی SD-208 بر روی بیان miRNA Let7g,18a,34a.22,20  در سلولهای ترانسفکت شده Y79 در مقایسه با نمونه های کنترل.. 109

4‌.7‌ Ct در واکنش Realtime PCR.. 110

فصل 5: بحث، نتیجه گیری و پیشنهادها 113

5‌.1‌ بحث   114

5‌.2‌ تاثیر بیان افزایشی TGIF2lX بر روی Cellular Viability در رده سلولی Y79. 116

5‌.3‌ تاثیر دارویSD-208  بر روی Cellular Viability در رده سلولی Y79 بیان کننده افزایشی TGIF2LX و کنترل  117

5‌.4‌ اثر SD-208 بر روی بیان TGIF2LX در رده سلولی Y79 ترانسفکت شده در مقایسه با کنترل..                         118

5‌.5‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیانmiRNA های مورد مطالعه. 118

5‌.5‌.1‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیان miRNAlet7g در رده سلولی Y79. 118

5‌.5‌.2‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیان miRNA18a در رده سلولی Y79. 119

5‌.5‌.3‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیان miRNA34a در رده سلولی Y79. 119

5‌.5‌.4‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیان miRNA22 در رده سلولی.. 119

5‌.5‌.5‌ اثر متقابل SD-208 و TGIF2LX بر روی بیان miRNA20a در رده سلولی Y79. 120

5‌.6‌ نتیجه گیری.. 120

       7.5 پیشنهاد ها .................................................................................................................................121

منابع و مراجع.. 122

پیوست ها 131

منبع:

1)Dryja TP, Morrow JF, Rapaport JM. Quantification of the paternal allele bias for new germline mutations in the retinoblastoma gene. Hum Genet 1997; 100:446.

2)Mahone MC,Burnett WS,Majerovics A,et al.The epidemiology of ophthalmic malignancies in New York State ophthalmology.1990;97:1143-1147.

3)Abramson DH.Retinoblastoma in the 20th century;past success and future challenges the weisenfeld lecture.invest ophthalmol vis Sci.2005;46:2683-2691.

4(Abramson DH, Beaverson K, Sangani P, et al. Screening for retinoblastoma: presenting signs as prognosticators of patient and ocular survival. Pediatrics 2003; 112:1248.

5)Broaddus E, Topham A, Singh AD. Incidence of retinoblastoma in the USA: 1975-2004. Br J Ophthalmol 2009; 93:21.

6)Seregard S, Lundell G, Svedberg H, Kivelä T. Incidence of retinoblastoma from 1958 to 1998 in Northern Europe: advantages of birth cohort analysis. Ophthalmology 2004; 111:1228.

7)Abramson DH, Ellsworth RM, Grumbach N, et al. Retinoblastoma: correlation between age at diagnosis and survival. J Pediatr Ophthalmol Strabismus 1986; 23:174.

8(Rubenfeld M, Abramson DH, Ellsworth RM, Kitchin FD. Unilateral vs. bilateral retinoblastoma. Correlations between age at diagnosis and stage of ocular disease. Ophthalmology 1986; 93:1016.

9(Kleinerman RA, Schonfeld SJ, Tucker MA. Sarcomas in hereditary retinoblastoma. Clin Sarcoma Res 2012; 2:15.

10(Lee WH, Bookstein R, Hong F, et al. Human retinoblastoma susceptibility gene: cloning, identification, and sequence. Science 1987; 235:1394.

11(Hethcote HW, Knudson AG Jr. Model for the incidence of embryonal cancers: application to retinoblastoma. Proc Natl Acad Sci U S A 1978; 75:2453.

12(Zhang J, Benavente CA, McEvoy J, et al. A novel retinoblastoma therapy from genomic and epigenetic analyses. Nature 2012; 481:329.

13(Khelfaoui F, Validire P, Auperin A, et al. Histopathologic risk factors in retinoblastoma: a retrospective study of 172 patients treated in a single institution. Cancer 1996; 77:1206

14(Shields JA, Shields CL, Parsons HM. Differential diagnosis of retinoblastoma. Retina 1991; 11:232.

15(Lohmann DR, Gallie BL. Retinoblastoma. In: GeneReviews. www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1452/ (Accessed on February 16, 2012).

16(DerKinderen DJ, Koten JW, Nagelkerke NJ, et al. Non-ocular cancer in patients with hereditary retinoblastoma and their relatives. Int J Cancer 1988; 41:499.

17(Char DH, Hedges TR 3rd, Norman D. Retinoblastoma. CT diagnosis. Ophthalmology 1984; 91:1347.

18(Pratt CB, Meyer D, Chenaille P, Crom DB. The use of bone marrow aspirations and lumbar punctures at the time of diagnosis of retinoblastoma. J Clin Oncol 1989; 7:140.

19(MacKay CJ, Abramson DH, Ellsworth RM. Metastatic patterns of retinoblastoma. Arch Ophthalmol 1984; 102:391.

20(Dhar SU, Chintagumpala M, Noll C, et al. Outcomes of integrating genetics in management of patients with retinoblastoma. Arch Ophthalmol 2011; 129:1428.

21(Uusitalo M, Wheeler S, O'Brien JM. New approaches in the clinical management of retinoblastoma. Ophthalmol Clin North Am 1999; 12:255.

22(Honavar SG, Singh AD, Shields CL, et al. Postenucleation adjuvant therapy in high-risk retinoblastoma. Arch Ophthalmol 2002; 120:923.

23(Kim JW, Kathpalia V, Dunkel IJ, et al. Orbital recurrence of retinoblastoma following enucleation. Br J Ophthalmol 2009; 93:463.

24(Blach LE, McCormick B, Abramson DH. External beam radiation therapy and retinoblastoma: long-term results in the comparison of two techniques. Int J Radiat Oncol Biol Phys 1996; 35:45.

25(Roarty JD, McLean IW, Zimmerman LE. Incidence of second neoplasms in patients with bilateral retinoblastoma. Ophthalmology 1988; 95:1583.

26(Shields CL, Shields JA, Cater J, et al. Plaque radiotherapy for retinoblastoma: long-term tumor control and treatment complications in 208 tumors. Ophthalmology 2001; 108:2116.

27(Rodriguez-Galindo C, Wilson MW, Haik BG, et al. Treatment of intraocular retinoblastoma with vincristine and carboplatin. J Clin Oncol 2003; 21:2019.

28) Hanahan D, Weinberg RA. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 2011 Mar 4;144(5):646-74.

29) Hosseini SV, Izadpanah A, Yarmohammadi H. Epidemiological changes in colorectal cancer in Shiraz, Iran: 1980-2000. 1980- 2000. ANZ J Surg. 2004;74(7):547-9.

30)Wilding,G.,Ugmeir,G.,Knabbe,C.,Flandwrs,K.and Gellman,E.,Differential effects of transforming growth on human prostate cancer cells invitro .Mol. cell .Endocrinol.,1989.62,79-87.

31) Akhurst RJ. TGF signaling in health and disease. Nat Genet. 2004;36(8):790-2.

32)Roberts,A.B.a W.,L.M. the two faces of transforming growth factor B in carcinogenesis.Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A.,2003.100,8621-8623.

33)Nguyen,D,X.,Bos,P.D.and Massagu e,J.Metastasis:from dissemination to organ-specific colonization.Nat.Rev. Cancer ,2009.9,274-284.

34)Bierie,B.a.M.,H.L.Transforming growth factor B(TGF-B) and inflammation in cancer.Cytokine Growth Factor Rev,2010.21,49-59.

35) Massague J.TGF-BETAsignal transduction. Annu Rev Biochem. 1998;67:753-91.

36)http://en.wikipedia.org/wiki/TGF-beta-signaling-pathwy.

37)Pardali K,M.A.,Actions of TGF-B as a tumor suppressor and prometastatic factor in human cancer. Biochim Biophys Acta, 2007. 1775:p.21-62. 38)Gastelli-Gair,J.,Implications of the spatial and temporal regulation of HOXgenes on development and evolution.,UNIVERSITY OF BASQUE COUNTY PRESS,1998.p.437-444.

39)Grier,D.G,ET AL,The pathophysiology of HOX genes and their role in cancer.,john Wiley and Sons ,2005.Ltd. p. 154-171.

40)Duboule,D.,The vertebrate limb:a model system to study the HOX/HOM gene network during development and evolution.1992.p.375-384.

41)T.R.,B.,Analysis of TALE superclass homeobox genes(MEIS, PBC, KNOX,Iroquois, TGIF) reveals a novel domain conserved between plants and animals. Nucleic Acids Res.,1997.25:p.7.

42)Bertolino,E.,Reimund,b.,Wildt-perinic ,D., and Clerc,R.G.A novel homeobox protein which recognizes a TGT core and functionally interferes with a retinoid responsive motif. J.Biol.chem,1995.270,31178-31188.

43)Wotton,D.,Lo,R.,S.,Swaby, L.A.,and Massague,J.J.Biol. chem.1999.274,37105-37110.

44)Sun,Y.,Liu,X.,Eaton,E.N.,Lane,W.S.,Lodish,H.F.,andWeinberg,R.A.Mol.Cell,1999.4,499-509.

45)Rooney,P.H.,Murray,G.I.,Haites,N.E.,Cassidy,J., and Mcleod, H.L.Comparative genomic hybridization and chromosomal instability in solid tumors.Br.J.Cancer, 1999.80,862-873.

46)moto I, P. A.,Watanabe T, Saito-Ohara F, Soeda E, Inazawa J.,Amplification and overexpression of TGIF2,a novel homeobox gene of the TALE superclass, in ovarian cancer cell lines. Biochem Biophys Res Commun, 2000.276:p.6.

47)Tiffany A.Melhuish,C.M.G.,and David Wotton,TGIF2 Interacts with Histone Deacetylase 1 and Represses Transcription, JBC Papers in press, June 26,2001.DOI 10.1074/jbc.

48)Blanco-Arias P,S.C.,Affara NA.,TJEhuman-specific Yp11.2/XQ21.3 homology block encodes potentially functional testis-specific TGIF- like retropson. Mamm genome,2002;13p.5.

49)Wang Y,Wang L, Wang Z.Transgenic analyses of TGIF family proteins in Drosophila imply their role in cell growth.J Genet Genomics.2008;35(8):457-65.

50)Aarabi M,Ousati-Ashtiani Z, Nazarian A, Modarressi MH ,Heidari M. Association of TGIFLX/Y mRNA expression with azoospermia in infertile men. Mol Reprod Dev.2008;75(12):1761-6.

51)Ousati-ashtiani Z,Ayati M,Modarresi MH,Raoofian R, Sabah Goulian B,Greene WK,et al. Association of TGIFLX/Y mRNA expression with prostate cancer. Med Oncol. 2009;26(1):73-7.

52)Gripp KW,Wotton D.Edwards MC, Rossler E,ADES L,Meinecke P,et al.Mutation in TGIF cause holoprosencephaly spectrum:Mutation review and genotype-phenotype correlation.Hum mutat.2004 Jul;24(1):43-51.

53)Abate-shen,C.,Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence. Nature Reviews Cancer,2002.2(10):p.777-785.

54)Ruan K, Fang X, Ouyang G. MicroRNAs: novelregulators in the hallmarks of human cancer . CancerLett. 2009 Nov 28;285(2):116-26.

55)Kim M, Kasinski AL, Slack FJ. MicroRNA therapeuticsin preclinical cancer models. Lancet Oncol. 2011Apr;12(4):319-21.

56)Lim , Li J , Ding X , He M , Chang SY . microRNA andCancer . AAPS J. 2010 Sep;12(3):309-17.

57)Cho WC. MicroRNAs: Potential biomarkers for cancerdiagnosis, prognosis and targets for therapy. Int JBiochem Cell Biol. 2010 Aug;42(8):1273-81.

58)Giovannetti E, Erozenci A, Smit J, Danesi R, PetersGJ. Molecular mechanisms underlying the role ofmicroRNAs (miRNAs) in anticancer drug resistanceand implications for clinical practice. Crit Rev OncolHematol. 2011 May 4. [Epub ahead of print]

59)Babashah S, Soleimani M. The oncogenic and tumoursuppressive roles of microRNAs in cancer andapoptosis. Eur J Cancer. 2011 May;47(8):1127-37.

60)Wouters MD, van Gent DC, Hoeijmakers JH, PothofJ. MicroRNAs, the DNA damage response and cancer.Mutat Res. 2011 Apr 6. [Epub ahead of print].

61)Schaefer A, Jung M, Kristiansen G, Lein M, SchraderM, Miller K, Stephan C, Jung K . MicroRNAs andcancer: current state and future perspectives in urologiconcology. Urol Oncol. 2010 Jan-Feb;28(1):4-13.

62(Ghassemi F, Chams H, Sabour S, Karkhaneh R, Farzbod F, Khodaparast M, Vosough P: Retinoblastoma: A Report from A Referral Center in Iran: 1979-2007. Iranian Journal of Ophthalmology 2012;24:31-37.

63(William CS Cho .OncomiRs: the discovery and progress of microRNAs in cancers. Molecular Cancer 2007, 6:60 doi:10.1186/1476-4598-6-60 .

64)Zhao JJ, Yang J, Lin J, Yao N, Zhu Y, Zheng J, Xu J, Cheng JQ, Lin JY, Ma X. Identification of miRNAs associated with tumorigenesis of retinoblastoma by miRNA microarray analysis. Childs Nerv Syst. 2009 Jan;25(1):13-20.

65)Clifton L. Dalgard , Marco Gonzalez ,Jennifer E. deNiro and Joan M. O'Brien. Differential MicroRNA-34a Expression and Tumor Suppressor Function in Retinoblastoma Cells Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. October 2009 vol. 50 no. 10 4542-4551 . 66)Sreenivasan S, Thirumalai K, Danda R, Krishnakum S. Effect of curcumin on miRNA expression in human Y79 retinoblastoma cells. Curre Eye Res. 2012 May;37(5):421-8.

67)Xu X, Jia R, Zhou Y, Song X, Wang J, Qian G, Ge S, Fan X.Microarray-based analysis: identification of hypoxia-regulated microRNAs in retinoblastoma cellsInt J Oncol. 2011 May;38(5):1385-93. doi: 10.3892/ijo.2011.

68)Benjamin Boyerinas, Sun-Mi Park, Annika Hau,The role of let-7 in cell differentiation and cancer. Endocrine-Related Cancer (2010) 17 F19–F36.

69)Tsang WP1, Kwok TT, The miR-18a* microRNA functions as a potential tumor suppressor by targeting on K-Ras. 2009 Jun;30(6):953-9. 70)Fan X1, Liu Y, Jiang J, Ma Z, Wu H, Liu T, Liu M, Li X, Tang H. miR-20a promotes proliferation and invasion by targeting APP in human ovarian cancer cells. 2010 May 15;42(5):318-24.

71)Pesta M1, Klecka J, Kulda V, Topolcan O, Hora M, Eret V, Ludvikova M, Babjuk M, Novak K, Stolz J, Holubec . Importance of miR-20a expression in prostate cancer tissue. 2010 Sep;30(9):3579-83.

72)Rizzo M1, Mariani L, Pitto L, Rainaldi G, Simili M. miR-20a and miR-290, multi-faceted players with a role in tumourigenesis and senescence. 2010 Nov;14(11):2633-40.

73)Martin Uhl ,Steffen Aulwurm ,Jörg Wischhusen , Markus Weiler ,Jing Ying Ma , SD-208, a Novel Transforming Growth Factor β Receptor I Kinase Inhi itor, Inhi its Growth and Invasiveness and Enhances Immunogenicity of Murine and Human Glioma Cells In vitro and In vivo . Cancer Res November 1, 2004 64; 7954

74)Khalid S. Mohammad,Delphine Javelaud,Pierrick G. J. Fournier, Maria Niewolna. TGF-β-RI Kinase Inhibitor SD-208 Reduces the Development and Progression of Melanoma Bone Metastases. Cancer Res January 1, 2011 71; 175

75)Aarabi M,Ousati-Ashtiani Z, Nazarian A, Modarressi MH ,Heidari M. Association of TGIFLX/Y mRNA expression with azoospermia in infertile men. Mol Reprod Dev.2008;75(12):1761-6.

76).Ousati-ashtiani Z,Ayati M,Modarresi MH,Raoofian R, Sabah Goulian B,Greene WK,et al. Association of TGIFLX/Y mRNA expression with prostate cancer. Med Oncol. 2009;26(1):73-7.

77) Hironobu Ihn . Autocrine TGF-b signaling in the pathogenesisof systemic sclerosis.

Published by Elsevier Ireland, 2007.

78)Rongrong Ge,Vaishali Rajeev,Partha Ray.Inhibition of Growth and Metastasis of Mouse Mammary Carcinoma by Selective Inhibitor of Transforming Growth Factor-B Type 1 Receptor Kinase In vivo.Clin Cancer Res 2006:2006

79)KUNIKO HORIE,1 HIDETOSHI YAMASHITA,1,2 AKIRA MOGI,3 SEIICHI TAKENOSHITA,3 AND KOHEI MIYAZONO1*.Lack of Transforming Growth Factor-b Type II Receptor Expression in Human Retinoblastoma Cells. J. Cell. Physiol. 175:305– 313, 1998.

80)Brown T.A. Gene Cloning & DNA Analysis: an introduction. 6th ed., 2010 .

81)Robert E. Farrell ,Jr. RNA Methodologies, 2005 .

82) M. Tevfik Dorak. Real-time PCR, 2006.

83)Michael W.Pfaffl Graham W.Horgan and Leo Dempfle.Nucleic Acid Research 2002 May 1:30(9):E36

84)Gel electrophoresis of protein. Mostafai Ali. Tazkie Press. 2008. [Farsi]

85) Walker J.M. (1996) SDS Polyacrylamide gel electrophoresis of proteins. In: The Protein Protocols Handbook (J.M. Wolkered.). Humana Press.

86) Hames B.D., Rickwood D. (1990) Gel Electrophoresis of Proteins, A Practical Approach. 2nd ed., IRL Press, Oxford.

87)Kapoun et al (2006) Transforming growth factor-β receptor type I receptor (TGFβRI) inase activity ut not p38 activation is required for TGFβRI-induced myofibroblast differentiation and profibrotic gene expression. Mol.Pharmacol. 70 518..

88)Leung et al (2006) Effect of transforming growth factor-β receptor I inase inhi itor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J.Pharmacol.Exp.Ther. 319 586.

89)Odashiro AN; Pereira P.R, Filho JP, Cruess SR;Miguel N. Burnier, Jr, Retinoblastoma in anadult: casereport and literature review .Can JOphthalmol 2005.;40(2).

90) Allison JW, James CA, Figarola MS. Pediatriccase of the day. Osteogenic sarcoma as a secondmalignancy with bilateral hereditary retinoblastoma.Radiographics. 1999 May-Jun;19(3):830-2.

91) Roysarkar TK, Biswas J, Gopal L. Newtumours in non-enucleated eyes of bilateral retinoblastoma patients. Indian J Ophthalmol.1994 Mar;42(1):19-22 .

92) Dyer MA, Rodriguez-Galindo C, Wilson MW.Use of Preclinical Models to Improve Treatment of Retinoblastoma. PLoS Med. 2005 Oct;2(10):e332. Epub 2005 Oct 25.

93) Rodriguez-Galindo C, Wilson MW, ChantadaG, Fu L, Qaddoumi I, Antoneli C, et al.Retinoblastoma: one world, one vision. Pediatrics.2008 Sep; 122(3):e763-70.

94) Abramson DH, Beaverson K, Sangani P, VoraRA, Lee TC, Hochberg HM, etal. Screening for retinoblastoma: presenting signs as prognosticators of patient and ocular survival. Pediatrics. 2003Dec;112(6 Pt 1):1248-55.

95) Benjamin Boyerinas, Sun-Mi Park, Annika Hau, Andrea E Murmann and Marcus E Peter.

The role of let-7 in cell differentiation and cancer Endocrine-Related Cancer (2010) 17 F19–F36.

96)Catron,K.M.,Wang,H.,Hu,G.,Shen,M.M.and Aate-Shen,C.Comparison of MSX-1 and MSX-2 suggests a molecular basis for functional redundancy. Mech.Dev,1996.55,185-199.

97(Freedman,V.C.B.a.L.P.,p21 is a transcriptional target of HOX10 in differentiating myelomonocytic cells and G.D,2000.2581-2586.

98(T.N.Dear1,W.H.C.,M.B.L.Carlton2,I.Lavenir1,T.Larson1,A.J.H.Smith1,A.J.Warren1,and M.V.S.a.T.H.M.J.Evans2.The Hox11 gene is essential for cell survival during spleen development.1995.121,2909-2915.

99) Imoto I, Pimkhaokham A, Watanabe T, Saito-Ohara F, Soeda E, Inazawa J. Amplification and overexpression of TGIF2, a novel Homeobox gene of the TALE superclass, in ovarian cancer cell lines. Biochem Biophys Res Commun. 2000;276(1):264-70)

100) Reza Raoofian, Majid Mojarrad and Mansour Heidari1, Impact of TGIFLX Expression on the Regulationof BCL2 and BAX in Prostate Cancer Cell Line(LNCaP).British Journal of Medicine & Medical Research3(4): 953-961, 2013.

101) Zahra RASHVAND , Mansour HEIDARI , Reza RAOOFIAN , Mohammad Hossein MODARRESI , Reza SHIRKOOHI . Induction of Apoptosis and Growth Suppression by Homeobox Gene TGIFLX in Prostate Cancer Cell Line Lncap. Iranian J Publ Health, Vol. 42, No. 11, Nov 2013, pp.1242-1252.

102) Abolfazl Akbari1, Saeid Amanpour, Samad Muhammadnejad2, Mohammad Hossein Ghahremani1,3,Seyed Hamidollah Ghaffari, Ahmad Reza Dehpour, Gholam Reza Mobini1, Fatemeh Shidfar1, Mahdi Abastabar6,Ahad Khoshzaban7, Ebrahim Faghihloo, Abbas Karimi10 and Mansour Heidari, Evaluation of antitumor activity of a TGF-betareceptor I inhibitor (SD-208) on human colon adenocarcinoma. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences 2014, 22:47.

103) Qased AB, Yi H, Liang N, Ma S, Qiao S, Liu X. MicroRNA-18a upregulates autophagy and ataxia telangiectasia mutated gene expression in HCT116 colon cancer cells. Mol Med Rep. 2013 Feb;7(2):559-64.

104) Mojgan Mirakholi1, Touraj Mahmoudi2, and Mansour Heidari3,4. MicroRNAs Horizon in Retinoblastoma. Acta Medica Iranica, 2013; 51(12): 823-829.