پایان نامه بررسی آلودگی و ژنوتایپینگ ژن کوآگولاز استافیلوکوکوس اورئوس در پنیرهای سنتی روستا های اطراف شهرستان ملکان و میا ندوآب

فهرست:

چکیده. ................................................................................................................................................................... .1

فصل اول: مروری بر پیشینه ی  تحقیق

مقدمه. ................................................................................................................................................................... . 2

اهداف تحقیق.......................................................................................................................................................... .3

جنس ا ستافیلوکوکوس.................................................................................................................................... .5

 طبقه‌بندی استافیلوکوکوس ا ورئوس........................................................................................................ .5

استافیلوکوکوس اورئوس.................................................................................................................................. 7

مورفولوژی................................................................................................................................................................ .7

ویژگی‌های ساختمانی. ...................................................................................................................................... .7

ویژگی های بیولوژیکی و بیوشیمیایی.......................................................................................................... ..8 پتیدوگلیگان        9

پلی سارکارید........................................................................................................................................................ .10

اسیدتیکوئیک...................................................................................................................................................... . 10

پروتئین. A............................................................................................................................................................... 11

فیزلوژی..................................................................................................................................................................... .11

خصوصیات کشت .............................................................................................................................................. ..11

متابولیسم............................................................................................................................................................. .12

شناسایی بیوشیمیایی..................................................................................................................................... . 13

روش های طبقه بندی.......................................................................................................................................... . 13

تعیین تیپ با باکتریوفاژ.................................................................................................................................... .13

تعیین انواع ............................................................................................................................................................ . 14

ژنتیک....................................................................................................................................................................... .14

مقاومت................................................................................................................................................................... .15

عوامل موثر در بیماریزایی.................................................................................................................................. . 15

گیرنده های پروتئینی.......................................................................................................................................... .16

آنزیم های خارج سلولی..................................................................................................................................... .16

گوآکولاز.................................................................................................................................................................. 17

فاکتور کلامپینگ................................................................................................................................................. 17

علت پلی مورفیسم کوآگولاز.......................................................................................................................... .18

لیپازها...................................................................................................................................................................... .18

هیالورونیداز............................................................................................................................................................ .18

استافیلوکیناز (فیبرینولیزین) ......................................................................................................................... 19

نوکلئاز مقاوم به حرارت.................................................................................................................................... .19

توکسین های سیتولیتیک................................................................................................................................ .19

توکسین آلفا (همولیزین-آلفا )....................................................................................................................... .19

توکسین بتا (اسفنگومیلیناز)......................................................................................................................... .19

توکسین دلتا.......................................................................................................................................................... .19

توکسین گاما........................................................................................................................................................ .20

لکوسیدین.............................................................................................................................................................. .20

توکسین ها ........................................................................................................................................................... 21

پایداری انتروتوکسین ها در برابر حرارت........................................................................................................ ..22

تولید انتروتوکسین............................................................................................................................................. . 23

توکسین اکسفولیاتیو....................................................................................................................................... .23

بیماریزایی خارج روده ای..................................................................................................................................... .23

مسمومیت غذایی استافیلوکوکوس........................................................................................................... 20

علایم مسمومیت غذایی.................................................................................................................................. .25

فصل دوم: روش تحقیق

مواد و روش کار...................................................................................................................................................... ..27

محیط های کشت ..............................................................................................................................................  27

محیط غنی کننده............................................................................................................................................... . 27

محیط انتخابی..................................................................................................................................................... .28

تست های تاییدی. ............................................................................................................................................... ..30

تست کاتالاز.......................................................................................................................................................... .30

تست گلوکز.......................................................................................................................................................... .30

تست مانیتول........................................................................................................................................................ .30

تست کوآگولاز...................................................................................................................................................... .31

مشاهده میکروسکوپی..................................................................................................................................... .32

نحوه نمونه برداری.................................................................................................................................................. .32

آماده کردن نمونه جهت انجام آزمایش. ........................................................................................................... .32

استخراج DNA.................................................................................................................................................... .33

تعیین کیفیت  DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز........................................................ . 34

 تعیین کمیت و کیفیت  DNA با استفاده از اسپکتروفتومتری........................................................ 34

واکنش زنجیره ای پلی مرازی............................................................................................................................... 35  

الکتروفورز فرآورده های PCR  ......................................................................................................................... 36

تفکیک قطعات تکثیریافته. .......................................................................................................................... . 37

بارگذاری محصولات تکثیر شده..................................................................................................................... ..37

فصل سوم:نتایج تحقیق

نتایج شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس با کشت............................................................................. ..32

نتایج تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز ............................................ 41

نتایج انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز براساس ژن Coa ........................................................................ . 42

نتایج تعیین توالی............................................................................................................................................... ..43

فصل چهارم:بحث و نتیجه گیری

نتیجه گیری وپیشنهاد...................................................................................................................................... . 51

فهرست منابع....................................................................................................................................................... 95

چکیده انگلیسی................................................................................................................................................. .98

منبع:

فهرست منابع فارسی

1- بروان پ.،1386،  مقدمه ای برکلون سازی ژن ها،  آنالیز DNA ترجمه ی طباطبایی، م.، چاپ پنجم خانه زیست شناسی، ص 225 تا240

2- براون، ب.،  1386، ژنوم 3، ترجمه فرد اصفهانی، پ واله یاری.، چاپ اول، انتشارات خسروی ص 76 تا 79.

3- تاج بخش، ح. 1375،، ژنتیک باکتری ها، چاپ چهارم، انتشارات دانشگاه تهران، ص 466تا 495.

4- جاکلیک، پ.  1382،، میکروب شناسی زینسر ترجمه رحیمی ، م.، آییژص 25تا 48.

5- جمشیدیان، م.، 1372، راهنمایی تشخیص باکتریولوژی ومایکولوژی درمانگاهی دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران، صفحات 152تا 148.

6-رضویلر، و.،1387، میکروب های بیماریزا در مواد غذایی واپید میولوژی مسمومیت های غذایی، انتشارات دانشگاه تهران،صفحات 127-135.

7- شیمی، الف.، 1376 باکتری شناسی دامپزشکی و بیماریهای باکتریایی،موسسه نشر جهاد وابسته به جهاد دانشگاهی صفحات، 85-94.

8-موسسه استاند ر و تحقیقات صنعتی ایران.،  1364، روش شناسایی وشمارش استافیلوکوکوس اورئوس کواگولازمثبت در موادغذایی، چاپ چهارم، استاندر 1194

9- موسسه استاند ر و تحقیقات صنعتی ایران.،  1370، پنیرسفید، چاپ سوم، استاندر 2344

10- موسسه استاند ر و تحقیقات صنعتی ایران.،  1374 ،آئین کاربرد وروش عمومی آزمایش میکروبی مواد غذایی، چاپ هفتم، شماره استاندارد 2344

11- موسسه استاند ر و تحقیقات صنعتی ایران.، 1375،آماده کردن نمونه های مواد غذایی وشمارش میکرومرگانیسم های مختلف،  تجدیدنظر اول چاپ دهم، شماره استاندر 356

12- محمدی ثانی،ع.(۱۳۸۸).بررسی آلودگی­های پنیرهای موجود در سطح توزیع شهرستان مشهد و قوچان به پاتوژن­های لیستریا منوسیتوژنز، استافیلوکوکوس اورئوس و اشرشیا کلی. دوازدهمین همایش ملی بهداشت محیط ایران، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی،دانشکده بهداشت.

13- مرحمتی زاده،م.ح.، کریم، گ.،نیک افروز،ر.،پیکر، ج.(۱۳۸۶).بررسی آلودگی پنیر سنتی به استافیلوکوکوس اورئوس کواگولازمثبت در شهرستان کازرون.علوم غذایی وتغذیه.سال۴.شماره۲.صفحات ۳۳-۴۴.

14- کریم، گ.  1387،، آزمون های میکروبی مواد غذایی ، انتشارات دانشگاه تهران، صفحات 128-138

15- کریم، گ.، 1380، شیروفرآورده های آن، انتشارات سپهر، صفحات 191- 185.

فهرست منابع غیرفارسی

16-Abbar،F.M.(2001).Tahir Mohammed M. Identification of som enterotoxigenic str ains of Staphylococci  form locally processed cheese.Food Microbiology،3.pp:33-36.

17-Almeido Filho E.، Nader Faiho.A.(2001).Occurrence Staphylococcuss aureus frescal type of chesse. Rev Saud publica، 34.pp:578-580.

18-Atanassova,V.,Meindl, A. and Ring ,C.(2001).prevalence of Staphylococcuss aureus and Staphylococcal enterotoxins in raw pork and uncooked smoked ham a comparison of classical coltoring detection and RFLP-PCR , International Journal of food microbiology ., Vol68,PP – 105-113              

19-Claudia،M.،Ander،D.P.B.،Hidalgo Campos، M.R.، Borges ،L. J. ،Kipnis، A. (2005).comparison of Staphylococcuss aureus isolates form food handlers،raw bovin، food Microbiology 76pp:567-571

20-Dastmalchi، H.،Ahmadi، M.، Mardani، K. and Batavani، R.A.(2009). Molecular typing  of Staphylococcuss aureus isdated form bovine mastitis based on polymorphism of the coagulase gene in the north west of Iran، Veterinary microbiology.، vol 137،pp 202-206.

21-Donnelly،C.B.،Blak،L.A.،Lewis،K.H.(2005).Ocurrence of coagulase-positive Staphlococci in chaddar chesse،Applied Microbiology vol.12،No.4.pp:311-315

22-Hasaliu،R.،Beli،E.،Terpollari،j.(2009).The influence of storage temperature of cheese on the incidence، Agriccultural science،41 (2)

23-Ikeda.T.،Morimoto.Y.،Makino.S.،Keui.(2006).Surveillance of Staphylococcuss in some markets in albanin، Research Journal of Agriccultural science،41(21)

24- Johnv.H. Judithf. R، and Barryd.C. (1998). Molecluar Typing of Staphylococcuss  aureus based on PCR  restriction fragment length Polymorphism and DNA sequene analysis of the coaglase gene.، Journal of clinical  microbiology، apr. 1998، P. 1083- 1089

25- Kumar.S، Alin K.، Ramavtar. S and Govid.S.(2008). Epidemiological typing of Staphylococcuss aureus by DNA restriction fragment length polymorphism of coa gene. veterinarski arhiv 78(1)، 31-38

26-Lamperll،H.، Villard،L.،Cha Beuvier،E.،Borgers، E.، Maurin ،F.F. Mazer Olles ،G.، NoY. ،kodjo.A.(2006). Idification and biotyping of coagulase positive staphylococci in ripend Franch  raw milk cheese and their in vitro ability to production entrotxcin،.Revue Med Vet،155.pp:92-96

27-Little،C.L.،Rhoades،J.R.،Sagoo،S.K.،Harris،j.،Greenwood،M.،Mithani،V.rana,K .(2008). Mclauchlin،J Microbiological quality of retail chesse made form raw thermizd  or pasterurizd  milk in the UK،.food Microbiology 25.pp:304-312.

28-Masatcioglu.T.M.Avsar.YK.(2005). Effect of flavourings،storage condition and storage time on survival of Staphylococcuss aureus in Surk cheese،.J.food prot.،68.pp:1487-91.

29- Mcdevitt,D . Vaudaux , p . , and , T.j.Foster , (2001)., Genetic evidence that bound coagulase of Staphylocococcus aureus isb not clumping factor ., Infection and immunity, Apr . 1992,P.1514 - 1523

30-Obrien،   M.،Hunt،K.،  Mcsweenety،  S.،Jordan،K. (2009). Occurrence of food born pathogens in Irish farhouse cheese،.food Microbiology 26.pp:910-914.

31-Omer، A.،Abdulwahed، A.، Schneider، E. and Usleber، E. (2008). Enteroxigenic propertie of Staphylococcuss aureus isolated form goat milk cheese، International journal of food microbiology.، vol. 124،pp.211-216

32-Pelisser،M.R.،K lein،C.S.،Ascoli،K.R.،Arisi،C.M.،(2002).، Occrrence of Staphylococcuss aureus and multipex PCR detection of classic enterotoxin genes in cheese and meatprodcts Brazilian of Microbiology 40.pp:145-148.

33- Phonimdaeny., M . Nowlan.P. (2000). The coagulase of Staphlococcus aureus 8325-4 sequence analysis and virulence of site – specific coagulase – deficient mutants . Biological sciences, microbiology, paper

34-Pereira , V.,Lopes, C.,Castro , A.,Silva ,J.,Gibbs, P. and Teixeira, P. (2009).Characterization for entrotoxin production Virulence factor, and antibiotic susceptibility of  Staphlococcus aureus isolate from various food in Portugal , food microbiology .,Vol26,PP.278-282

35- Prasart phonimdaeng, Mary oreilly, Paulw.o, toole and timothyj. Foster. (1998),Molecular cloning expression of the coagulase gene of Staphylococcuss aureus 8325-4 . Journal of general microbiology ., 134,75-83. Printed in great Britain

36- Rall، V.L.M.، Vieira، F.P.، Rall، R.، Vietis، R.L.، Feranades، A.and Cardoso، K.F.G. (2008). PCR detection of staphy lococcal enterotoxin genes in Staphylococcuss aureus strains isolated form raw and pastevrised milk، Science Direct veterinary microbiology.، Vol 132، pp 408 -413

37-Rodriguez. E.،Calzada J.،Arquez J.L.، Rodriguez  J.M.، N unez M. Medina.M.(2005). Antimicrobial activity of pediocin –producing Lactococcus lactis on Listeria monocytogenes،Staphylococcuss aureus and Escherichia coli O157:H7 in cheese،.Internaltiona Dairy Journal.15،issue 1.pp:51-57.

38-Shopsin. B، Gomez.M، Waddington.M.، Riehman.M.، Kreiswrth. B.N. (2000). Use of coagulase gene (coa) repeat region nucleotide sequences for typing of methicillin – resistant staphlcoccus aureas strains. Journal of clinical microbiology sept 2000، p. 3453 - 3456

39-Schrade،J.P.، Yager،J.(2005). Implication of milk and milk products in food disease in France and different industrialized countries،.Int.J.Food Microbiol.67.pp:1-170.

 40-Silva، E.،Boechat،J.U.D and Silva ،N.(2005).Coagulase  gene polymorphism Staphylococcuss aureus isolate form goat mastitis in Brazilian dairy herds،Letters applied Microbiology ISSN 266-8254

41-Singh،P.،Praksh،A. (2010).Prevalence of coagulase positive pathogenic Staphycoccus in milk products collected form unorganized form unorganized sector of agre،.acte argiculturae slovenica،96.pp:37-41

42-Soltan Dallal،M.M.،Salehipour،Z.،Eshraghi،S.،Fallah Mehrabadi،J. ،Bakhtiari،R، (2009).Occurrence and molecular characterization of Staphylococcuss aureus strains isolated form meat and dariy products PCR-RFLP، Ann microbial.60.pp:189-196

43- Swee-hangoh, Seank.Byrne, y.l.zhang, and anthonyw. Chow. (1992). Molecular typing of Staphylococcus aureus on the basis of coagulase gene polymorphisms, Journal of clinical microbiology, July 1992, p, 1642- 1645

44-Tekinsen.K.، Ozdemir،Z. (2005).Prevalence of food born pathogens in Turkish Van Otlu (Herb) cheese،.food Control 17.pp:707-711